Ligation Independent Cloning (LIC) obviates the need for the time-consuming ligation step of traditional cloning methods. In traditional cloning, base-pairing in the short overlapping regions (usually 4 bp) does not provide enough stability to hold the plasmid together through the transformation/replication process.

Ligation Independent Cloning (LIC) is a technique developed in the early 1990s as an alternative to restriction enzyme/ligase cloning. Inserts are usually PCR amplified and vectors are made linear either by restriction enzyme digestion or by PCR.

LIC（音“立刻”）技术，全称为ligation–independent cloning （不依赖于连接反应克隆），已经在表达载体的构建方面得到了广泛应用。 LIC技术提高了表达 载体构建 过程中的连接效率，降低了克隆产物 假阳性率 ，是一个对初学者极其友好的 分子克隆 手段。

2020年4月9日 · 不依赖于连接的克隆（Ligation-independent cloning，LIC）是在1990s首次开发出来的。 传统的限制性酶克隆使用了较短的 粘性末端 ，而LIC运用了T4 DNA聚合酶的核酸外切酶活性，创造了更长的大约10-12个碱基的粘性末端。

同传统的基于限制性内切酶和DNA连接酶的克隆方法相比，新型体外重组克隆具有不依赖限制酶切位点和实现无痕克隆以及多片段的同时组装的特点。 新型体外重组克隆主要包括不依赖连接克隆（LIC）和一步等温反应克隆。 · 不依赖连接克隆 ·. 1不依赖连接克隆（LIC） 1990年，Charalampos Aslanidis和Pieter J.de Jong报道了一种不依赖于连接反应的克隆方法。 其原理如图1所示： 图1 LIC克隆示意图. 接下来将所得到的带有粘性末端的两种片段混合并进行变性和 …

Ligation-independent cloning (LIC) is a form of molecular cloning that can be performed without the use of restriction endonucleases or DNA ligase. The technique was developed in the early 1990s as an alternative to restriction enzyme/ligase cloning. [1]

LIC cloning allows insertion of DNA fragments without using restriction enzymes into specific vectors containing engineered overhangs. The procedure is based on the generation of complementary single stranded DNA overhangs in vector and insert using the proofreading capability of T4 DNA polymerase.

不依赖于连接反应的高效克隆方法(ligation–independent cloning, LIC)是以同源重组的基本原理，利用T4 DNA聚合酶的3′-5′外切酶活性在待插入片段以及线性载体的末端产生单链突出，通过同源序列在体外完成交换重组，达到基因克隆目的。

Li & Elledge所建立的不依赖序列和连接的克隆方法 (sequence and ligation-independent cloning，SLIC)就能满 足上述要求．该方法不受DNA序列的限制，可以将任 意序列的多个DNA片段组装到一起，而且不需要连接 反应即可完成体外的重组．

LIC（音“立刻”）技术，全称为ligation–independent cloning （不依赖于连接反应克隆），已经在表达载体的构建方面得到了广泛应用。 LIC技术提高了表达载体构建过程中的连接效率，降低了克隆产物假阳性率，是一个对初学...